Un mondo, una lotta
─Cooperazione internazionale per costruire una comunità globale di destino comune che risponda alla sfida della pandemia COVID-19
Il nuovo coronavirus che si sta diffondendo in tutto il mondo ha portato a una crisi pandemica globale COVID-19 in corso.Il nuovo coronavirus non ha confini, nessun Paese sarà risparmiato da questa battaglia contro il COVID-19.In risposta a questa pandemia mondiale di COVID-19, Liming Bio-Products Corp sta contribuendo al benessere delle nostre comunità globali.
Il nostro mondo si trova attualmente ad affrontare l'impatto senza precedenti della nuova pandemia di coronavirus 2019 (COVID-19).Ad oggi, non esiste un farmaco efficace disponibile per il trattamento di questa malattia.Tuttavia, molti test diagnostici sono stati sviluppati per la rilevazione di COVID-19.Questi test si basano su metodi molecolari o sierologici per rilevare i nuovi biomarcatori di acido nucleico o anticorpi specifici del coronavirus.Poiché il COVID-19 ha raggiunto lo stato di pandemia, la diagnosi precoce della nuova infezione da coronavirus è fondamentale per valutare la diffusione del virus e contenerlo, ma non esiste ancora un test perfetto per l'uso universale.Dobbiamo sapere quali test potrebbero essere potenzialmente utilizzati per lo screening, la diagnosi e il monitoraggio dell'infezione da COVID-19 e quali sono i loro limiti.È molto importante come utilizzare al meglio questi strumenti scientifici e aiutare a identificare e controllare l'emergere di questa malattia grave e in rapida diffusione.
Lo scopo del rilevamento del nuovo coronavirus è determinare se un individuo che ha l'infezione da COVID-19 o un portatore asintotico che può diffondere il virus in silenzio, per fornire informazioni essenziali per guidare il processo decisionale per il trattamento clinico.Studi precedenti hanno dimostrato che il 70% delle decisioni cliniche dipende dai risultati dei test.Quando vengono utilizzati metodi di rilevamento diversi, anche i requisiti dei kit di reagenti di rilevamento sono diversi.
Figura 1
Figura 1:Diagramma che mostra le fasi chiave dei livelli generali di biomarcatori durante il tipico decorso dell'infezione da COVID-19.L'asse X indica il numero di giorni di infezione e l'asse Y indica la carica virale, la concentrazione di antigeni e la concentrazione di anticorpi in periodi diversi.L'anticorpo si riferisce agli anticorpi IgM e IgG.Sia la RT-PCR che il rilevamento dell'antigene vengono utilizzati per rilevare la presenza o l'assenza di un nuovo coronavirus, che è una prova diretta per la diagnosi precoce dei pazienti.Entro una settimana dall'infezione virale, è preferibile il rilevamento mediante PCR o il rilevamento dell'antigene.Dopo l'infezione da nuovo coronavirus per circa 7 giorni, l'anticorpo IgM contro il nuovo coronavirus è gradualmente aumentato nel sangue del paziente, ma la durata dell'esistenza è breve e la sua concentrazione diminuisce rapidamente.Al contrario, l'anticorpo IgG contro il virus compare più tardi, di solito circa 14 giorni dopo l'infezione da virus.La concentrazione di IgG aumenta gradualmente e persiste a lungo nel sangue.Pertanto, se l'IgM viene rilevata nel sangue del paziente, significa che il virus è stato infettato di recente, che è un marker di infezione precoce.Quando l'anticorpo IgG viene rilevato nel sangue del paziente, significa che l'infezione virale esiste da tempo.Viene anche chiamata infezione tardiva o infezione precedente.È spesso visto in pazienti che sono nella fase di recupero.
I biomarcatori del nuovo coronavirus
Il nuovo coronavirus è un virus a RNA, composto da proteine e acidi nucleici.Il virus invade il corpo (umano) dell'ospite, entra nelle cellule attraverso il recettore ACE2 corrispondente al sito di legame e si replica nelle cellule ospiti, facendo sì che il sistema immunitario umano risponda agli invasori estranei e produca anticorpi specifici.Pertanto, gli acidi nucleici e gli antigeni della fiala e gli anticorpi specifici contro il nuovo coronavirus possono teoricamente essere utilizzati come biomarcatori specifici per la rilevazione del nuovo coronavirus.Per il rilevamento dell'acido nucleico, la tecnologia RT-PCR è la più comunemente utilizzata, mentre i metodi sierologici sono comunemente usati per il rilevamento dei nuovi anticorpi specifici del coronavirus.Attualmente, ci sono una varietà di metodi di test disponibili che possiamo scegliere per testare l'infezione da COVID-19 [1].
Principi di base dei principali metodi di prova per il nuovo coronavirus
Finora sono disponibili molti test diagnostici per COVID_19, con più kit di test che ricevono l'approvazione in base a un'autorizzazione all'uso di emergenza ogni giorno.Sebbene i nuovi sviluppi dei test che escono con così tanti nomi e formati diversi, tutti gli attuali test COVID_19 si basano fondamentalmente su due principali tecnologie: il rilevamento dell'acido nucleico per l'RNA virale e i test immunologici sierologici che rilevano gli anticorpi specifici del virus (IgM e IgG).
01. Rilevazione degli acidi nucleici
La reazione a catena della trascrizione-polimerasi inversa (RT-PCR), l'amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP) e il sequenziamento di nuova generazione (NGS) sono i metodi comuni dell'acido nucleico per il rilevamento del nuovo RNA del coronavirus.RT-PCR è il primo tipo di test per COVID-19, raccomandato sia dall'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) che dal Centro statunitense per il controllo e la prevenzione delle malattie (CDC).
02.Rilevamento sierologico di anticorpi
L'anticorpo è una proteina protettiva prodotta nel corpo umano in risposta all'infezione da virus.L'IgM è un primo tipo di anticorpo mentre l'IgG è un anticorpo di tipo successivo.Il campione di siero o plasma viene solitamente esaminato per la presenza di specifici tipi di IgM e IgG dell'anticorpo per la valutazione delle fasi acute e convalescenti dell'infezione da COVID-19.Questi metodi di rilevamento basati su anticorpi includono il test immunocromatografico dell'oro colloidale, l'immunocromatografia in lattice o microsfere fluorescenti, il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) e il test di chemiluminescenza.
03.Rilevamento dell'antigene virale
L'antigene è una struttura del virus riconosciuta dal corpo umano che attiva il sistema di difesa immunitaria per produrre anticorpi per eliminare il virus dal sangue e dai tessuti.Un antigene virale presente sul virus può essere preso di mira e rilevato mediante test immunologico.Come l'RNA virale, anche gli antigeni virali sono presenti nel tratto respiratorio degli individui infetti e possono essere utilizzati per diagnosticare la fase acuta dell'infezione da COVID-19.Pertanto, si consiglia spesso di raccogliere campioni delle vie respiratorie superiori come saliva, tamponi nasofaringei e orofaringei, espettorato per tosse profonda, liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF) per il test dell'antigene iniziale.
Selezione di metodi di test per il nuovo coronavirus
La selezione di un metodo di analisi coinvolge molti fattori, tra cui l'impostazione clinica, il controllo della qualità dei test, i tempi di consegna, i costi dei test, i metodi di raccolta dei campioni, i requisiti tecnici del personale di laboratorio, i requisiti delle strutture e delle apparecchiature.Il rilevamento di acidi nucleici o antigeni virali serve a fornire prove dirette della presenza dei virus e confermare la diagnosi di una nuova infezione da coronavirus.Sebbene esistano molti metodi per il rilevamento dell'antigene, la loro sensibilità di rilevamento del nuovo coronavirus è teoricamente inferiore a quella dell'amplificazione RT-PCR.Il test degli anticorpi consiste nel rilevamento degli anticorpi anti-virus prodotti nel corpo umano, che è in ritardo nel tempo e spesso non può essere utilizzato per la diagnosi precoce durante la fase acuta dell'infezione da virus.L'impostazione clinica per le applicazioni di rilevamento può variare e anche i siti di raccolta dei campioni possono essere diversi.Per il rilevamento degli acidi nucleici virali e degli antigeni, il campione deve essere raccolto nel tratto respiratorio in cui è presente il virus, come tamponi nasofaringei, tamponi orofaringei, espettorato o liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF).Per il rilevamento basato sugli anticorpi, il campione di sangue deve essere raccolto ed esaminato per la presenza di anticorpi specifici anti-virus (IgM/IgG).Tuttavia, i risultati del test degli anticorpi e dell'acido nucleico possono completarsi a vicenda.Ad esempio, quando il risultato del test è l'acido nucleico negativo, IgM negativo ma IgG positivo, questi risultati indicano che il paziente non è attualmente portatore del virus, ma è stato recuperato dalla nuova infezione da coronavirus.[2]
Vantaggi e svantaggi dei nuovi test per il coronavirus
Nel Protocollo di diagnosi e trattamento per la polmonite da nuovo coronavirus (versione di prova7) (rilasciato dalla Commissione sanitaria nazionale e dall'amministrazione statale della medicina tradizionale cinese il 3 marzo 2020), il test dell'acido nucleico viene utilizzato come metodo gold standard per la diagnosi del romanzo infezione da coronavirus, mentre il test degli anticorpi è anche considerato uno dei metodi di conferma per la diagnosi.
Reperti patogeni e sierologici
(1) Risultati patogeni: l'acido nucleico del nuovo coronavirus può essere rilevato in tamponi nasofaringei, espettorato, secrezioni del tratto respiratorio inferiore, sangue, feci e altri campioni utilizzando i metodi RT-PCR e/o NGS.È più accurato se i campioni sono ottenuti dal tratto respiratorio inferiore (espettorato o estrazione del tratto aereo).I campioni devono essere inviati per il test il prima possibile dopo la raccolta.
(2) Risultati sierologici: le IgM specifiche per il virus NCP diventano rilevabili circa 3-5 giorni dopo l'insorgenza;Le IgG raggiungono una titolazione di almeno 4 volte l'aumento durante la convalescenza rispetto alla fase acuta.
Tuttavia, la selezione dei metodi di analisi dipende dall'ubicazione geografica, dalle normative mediche e dalle impostazioni cliniche.Negli Stati Uniti, il NIH ha pubblicato le Linee guida per il trattamento della malattia da Coronavirus 2019 (COVID-19) (sito aggiornato: 21 aprile 2020) e la FDA ha pubblicato la Politica per i test diagnostici per la malattia da Coronavirus-2019 durante l'emergenza sanitaria pubblica (pubblicata il 16 marzo 2020 ), in cui il test sierologico degli anticorpi IgM/IgG selezionato solo come test di screening.
Metodo di rilevamento degli acidi nucleici
RT_PCR è un test dell'acido nucleico altamente sensibile progettato per rilevare se il nuovo RNA del coronavirus è presente o meno nel campione respiratorio o in altri campioni.Un risultato positivo del test PCR indica la presenza di nuovo RNA di coronavirus nel campione per confermare l'infezione da COVID-19.Un risultato negativo del test PCR non significa l'assenza dell'infezione da virus perché potrebbe essere influenzato dalla scarsa qualità del campione o dal punto temporale della malattia nella fase di recupero, ecc.Sebbene la RT-PCR sia un test altamente sensibile, presenta diversi inconvenienti.I test RT-PCR possono essere laboriosi e dispendiosi in termini di tempo, e dipendono in modo cruciale dall'elevata qualità del campione.Questa può essere una sfida perché la quantità di RNA virale non solo varia enormemente tra i diversi pazienti, ma può anche variare all'interno dello stesso paziente a seconda dei momenti in cui viene raccolto il campione, nonché delle fasi dell'infezione o dell'insorgenza dei sintomi clinici.Il rilevamento del nuovo coronavirus richiede campioni di alta qualità che contengano una quantità sufficiente di RNA virale intatto.
Il test RT-PCR può dare un risultato negativo errato (falso negativo) per alcuni pazienti con infezione da COVID-19.Come sappiamo, i principali siti di infezione del nuovo coronavirus si trovano a livello del polmone e delle vie respiratorie inferiori, come alveoli e bronchi.Pertanto, il campione di espettorato da una tosse profonda o il fluido di lavaggio broncoalveolare (BALF) considerato avere la più alta sensibilità per il rilevamento virale.Tuttavia, nella pratica clinica, i campioni vengono spesso raccolti dal tratto respiratorio superiore mediante tamponi nasofaringei o orofaringei.La raccolta di questi campioni non è solo scomoda per i pazienti, ma richiede anche personale appositamente addestrato.Per rendere il campionamento meno invasivo o più facile, in alcuni casi ai pazienti può essere somministrato un tampone orale e consentire loro di prelevare un campione dalla mucosa buccale o tamponare loro stessi la lingua.Senza RNA virale sufficiente, RT-qPCR può restituire un risultato del test falso negativo.Nella provincia di Hubei, in Cina, la sensibilità RT-PCR nel rilevamento iniziale è stata segnalata solo del 30%-50% circa, con una media del 40%.L'alto tasso di falsi negativi è stato molto probabilmente causato da un campionamento insufficiente.
Inoltre, il test RT-PCR richiede personale altamente qualificato per eseguire complesse fasi di estrazione dell'RNA e procedure di amplificazione PCR.Richiede inoltre un livello più elevato di protezione della biosicurezza, una struttura di laboratorio speciale e uno strumento PCR in tempo reale.In Cina, il test RT-PCR per il rilevamento di COVID-19 deve essere eseguito nei laboratori di livello 2 di biosicurezza (BSL-2), con protezione del personale utilizzando la pratica di livello 3 di biosicurezza (BSL-3).In base a questi requisiti, dall'inizio di gennaio all'inizio di febbraio 2020, la capacità del laboratorio CDC di China Wuhan è stata in grado di rilevare solo poche centinaia di casi al giorno.Normalmente, questo non sarebbe un problema quando si testano altre malattie infettive.Tuttavia, quando si affronta una pandemia globale come il COVID-19 con potenzialmente milioni di persone da testare, la RT-PCR diventa un problema critico a causa dei suoi requisiti per speciali strutture di laboratorio o attrezzature tecniche.Questi svantaggi possono limitare l'utilizzo della RT-PCR come strumento efficiente per lo screening e possono anche portare a ritardi nei rapporti sui risultati dei test.
Metodo di rilevamento degli anticorpi sierologici
Con il progredire del decorso della malattia, specialmente nelle fasi intermedie e tardive, il tasso di rilevamento degli anticorpi è molto alto.Uno studio al Wuhan Central South Hospital ha mostrato che il tasso di rilevamento degli anticorpi potrebbe raggiungere oltre il 90% nella terza settimana di infezione da COVID-19.Inoltre, l'anticorpo è il prodotto della risposta immunitaria umana contro il nuovo coronavirus.Il test degli anticorpi offre numerosi vantaggi rispetto alla RT-PCR.In primo luogo, il test sierologico degli anticorpi è semplice e rapido.I test del flusso laterale degli anticorpi possono essere utilizzati presso il punto di cura per fornire un risultato in 15 minuti.In secondo luogo, il bersaglio rilevato dal test sierologico è l'anticorpo, noto per essere molto più stabile dell'RNA virale.Durante la raccolta, il trasporto, la conservazione e il test, i campioni per i test anticorpali sono generalmente più stabili dei campioni per RT-PCR.In terzo luogo, poiché l'anticorpo è distribuito uniformemente nella circolazione sanguigna, vi è una variazione di campionamento inferiore rispetto al test dell'acido nucleico.Il volume del campione richiesto per il test degli anticorpi è relativamente piccolo.Ad esempio, 10 microlitri di sangue prelevato dal dito sono sufficienti per l'uso nel test del flusso laterale degli anticorpi.
In generale, il test degli anticorpi viene scelto come strumento supplementare per il rilevamento dell'acido nucleico per migliorare il tasso di rilevamento del nuovo coronavirus durante il decorso della malattia.Quando il test degli anticorpi viene utilizzato insieme a un test dell'acido nucleico, può aumentare l'accuratezza del test per la diagnosi di COVID19 riducendo i potenziali risultati falsi positivi e falsi negativi.L'attuale guida operativa non consiglia di utilizzare due tipi di test separatamente come formato di rilevamento indipendente, ma dovrebbe essere utilizzato come formato combinato.[2]
Figura 2:La corretta interpretazione dei risultati del test dell'acido nucleico e degli anticorpi per l'individuazione di una nuova infezione da coronavirus
Figura 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Nuovo kit di test rapido doppio per anticorpi IgM/IgG contro il coronavirus (StrongStep®Test rapido per anticorpi IgM/IgG SARS-CoV-2, immunocromatografia al lattice)
Figura 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novel Coronavirus (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR kit (rilevamento di tre geni, metodo della sonda fluorescente).
Nota:Questo kit PCR altamente sensibile e pronto all'uso è disponibile in formato liofilizzato (processo di liofilizzazione) per la conservazione a lungo termine.Il kit può essere trasportato e conservato a temperatura ambiente ed è stabile per un anno.Ciascuna provetta di premiscela contiene tutti i reagenti necessari per l'amplificazione PCR, inclusi trascrittasi inversa, Taq polimerasi, primer, sonde e substrati dNTP. Gli utenti possono semplicemente ricostituire la miscela aggiungendo acqua di grado PCR insieme al modello e quindi caricare su uno strumento PCR per eseguire l'amplificazione.
In risposta al nuovo focolaio di coronavirus, Liming Bio-Products Co., Ltd. ha lavorato rapidamente per sviluppare due kit diagnostici per consentire ai laboratori di salute pubblica e clinica di diagnosticare rapidamente l'infezione da COVID-19.Questi kit sono molto adatti per l'uso per screening su larga scala in paesi e regioni in cui il nuovo focolaio di coronavirus si sta rapidamente diffondendo e per fornire diagnosi e conferma per l'infezione da COVID-19.Questi kit possono essere utilizzati solo con l'autorizzazione all'uso di emergenza prenotificata (PEUA).Le prove sono limitate ai laboratori certificati secondo i regolamenti delle autorità nazionali o locali.
Metodo di rilevamento dell'antigene
1. La rilevazione dell'antigene virale è classificata nella stessa categoria di rilevazione diretta della rilevazione dell'acido nucleico.Questi metodi di rilevamento diretto cercano prove di agenti patogeni virali nel campione e possono essere utilizzati per la diagnosi di conferma.Tuttavia, lo sviluppo di kit di rilevamento dell'antigene richiede un'elevata qualità di anticorpi monoclonali con forte affinità e alta sensibilità in grado di riconoscere e catturare i virus patogeni.Di solito sono necessari più di sei mesi per selezionare e ottimizzare un anticorpo monoclonale adatto all'uso nella preparazione del kit di rilevamento dell'antigene.
2. Attualmente, i reagenti per il rilevamento diretto del nuovo coronavirus sono ancora in fase di ricerca e sviluppo.Pertanto, nessun kit di rilevamento dell'antigene è stato validato clinicamente e disponibile in commercio.Sebbene sia stato precedentemente segnalato che un'azienda diagnostica di Shenzhen ha sviluppato un kit di rilevamento dell'antigene e testato clinicamente in Spagna, l'affidabilità e l'accuratezza del test non possono essere convalidate a causa della presenza di problemi di qualità dei reagenti.Ad oggi, NMPA (ex China FDA) non ha ancora approvato alcun kit di rilevamento dell'antigene per uso clinico.In conclusione, sono stati sviluppati diversi metodi di rilevamento.Ogni metodo ha i suoi vantaggi e limiti.I risultati di diversi metodi possono essere utilizzati per la verifica e il complemento.
3. La produzione di un kit di test COVID-19 di qualità dipende fortemente dall'ottimizzazione durante la ricerca e lo sviluppo.Liming Bio-Product Co., Ltd.i kit di test sono necessari per soddisfare rigorosi standard di produzione e controllo qualità per garantire che forniscano i massimi livelli di prestazioni e coerenza.Gli scienziati di Liming Bio-Product Co., Ltd. hanno oltre vent'anni di esperienza nella progettazione, test e ottimizzazione di kit diagnostici in vitro per garantire il massimo livello di prestazioni nella quantificazione analitica.
Durante la pandemia di COVID-19, il governo cinese ha dovuto affrontare l'impennata dell'enorme richiesta di materiali per la prevenzione delle epidemie negli hotspot internazionali.Il 5 aprile, alla conferenza stampa del meccanismo congiunto di prevenzione e controllo del Consiglio di Stato "Rafforzare la gestione della qualità dei materiali medici e regolare l'ordine del mercato", Jiang Fan, ispettore di primo livello del Dipartimento del commercio estero del Ministero of Commerce, ha dichiarato: "In seguito, concentreremo i nostri sforzi su due aspetti, in primo luogo, per accelerare il supporto di più forniture mediche necessarie alla comunità internazionale e, inoltre, per migliorare il controllo di qualità, la regolamentazione e la gestione dei prodotti. Daremo il contributo della Cina per rispondere insieme all'epidemia globale e costruire una comunità con un futuro condiviso per l'umanità.
Figura 5:Il nuovo reagente per coronavirus di Liming Bio-Products Co., Ltd. ha ottenuto il certificato di registrazione UE CE
Il certificato onorario
Houshenshan
Figura 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. ha sostenuto il Wuhan Vulcan(HouShenShan) Mountain Hospital nella lotta contro l'epidemia di COVID-19 e ha ricevuto il certificato onorario della Croce Rossa di Wuhan.L'ospedale di montagna di Wuhan Vulcan è l'ospedale più famoso della Cina specializzato nel trattamento di pazienti con COVID - 19 gravi.
Mentre il nuovo focolaio di coronavirus continua a diffondersi in tutto il mondo, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. si sta adoperando per supportare e aiutare le comunità di tutto il mondo con le nostre tecnologie innovative a combattere questa minaccia globale senza precedenti.I test rapidi dell'infezione da COVID-19 sono una parte fondamentale per affrontare questa minaccia.Continuiamo a contribuire in modo significativo fornendo piattaforme diagnostiche di alta qualità nelle mani degli operatori sanitari in prima linea in modo che le persone possano ricevere i risultati dei test critici di cui hanno bisogno.Gli sforzi di Liming Bio-products Co., Ltd. nella battaglia contro la pandemia di COVID-19 sono di contribuire con le nostre tecnologie, esperienze e competenze alle comunità internazionali per la costruzione di una comunità globale del destino.
Premi a lungo~Scansiona e seguici
E-mail: sales@limingbio.com
Sito web: https://limingbio.com
Tempo di pubblicazione: 01-maggio-2020
