Nuovo kit PCR multiplex in tempo reale per il coronavirus (SARS-CoV-2).
Questo kit PCR altamente sensibile e pronto all'uso è disponibile in formato liofilizzato (processo di liofilizzazione) per la conservazione a lungo termine.Il kit può essere trasportato e conservato a temperatura ambiente ed è stabile per un anno.Ciascuna provetta di premiscela contiene tutti i reagenti necessari per l'amplificazione PCR, inclusi trascrittasi inversa, Taq polimerasi, primer, sonde e substrati dNTP.Ha solo bisogno di aggiungere 13ul di acqua distillata e 5ul di modello di RNA estratto, quindi può essere eseguito e amplificato sugli strumenti PCR.
La macchina qPCR deve soddisfare i seguenti requisiti:
1. Inserire un volume di provetta per PCR da 8 strisce da 0,2 ml
2. Avere più di quattro canali di rilevamento:
Canale | Eccitazione (nm) | Emissione (nm) | Coloranti precalibrati |
1. | 470 | 525 | FAM, SYBR Verde I |
2 | 523 | 564 | VIC, HEX, TET, JOE |
3. | 571 | 621 | ROX, TEXAS-ROSSO |
4 | 630 | 670 | CY5 |
Piattaforme PCR:
7500Sistema PCR in tempo reale, Biorad CF96, Sistema di rilevamento PCR in tempo reale iCycler iQ™, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
La difficoltà del trasporto a catena del freddo del reagente di rilevamento dell'acido nucleico del Novel Coronavirus
Quando i reagenti di rilevamento dell'acido nucleico convenzionali vengono trasportati a lunga distanza, è necessario lo stoccaggio e il trasporto della catena del freddo (-20 ± 5) ℃ per garantire che il bioattivo dell'enzima nei reagenti rimanga attivo.Per assicurarsi che la temperatura raggiunga lo standard, sono necessari diversi chilogrammi di ghiaccio secco per ogni scatola di reagente per il test dell'acido nucleico anche inferiore a 50 g, ma può durare solo due o tre giorni.Dal punto di vista della pratica industriale, il peso effettivo dei reagenti emessi dai produttori è inferiore al 10% (o molto inferiore a questo valore) del contenitore.La maggior parte del peso proviene da ghiaccio secco, impacchi di ghiaccio e scatole di schiuma, quindi il costo del trasporto è estremamente elevato.
Nel marzo 2020, il COVID-19 ha iniziato a diffondersi su larga scala all'estero e la domanda di reagente per il rilevamento dell'acido nucleico del nuovo Coronavirus è aumentata notevolmente.Nonostante l'alto costo di esportazione dei reagenti nella catena del freddo, la maggior parte dei produttori può ancora accettarlo a causa della grande quantità e dell'alto profitto.
Tuttavia, con il miglioramento delle politiche nazionali di esportazione per i prodotti anti-pandemici, nonché il potenziamento del controllo nazionale sul flusso di persone e sulla logistica, vi è un'estensione e un'incertezza nei tempi di trasporto dei reagenti, che hanno provocato importanti problemi di prodotto causati dal trasporto.Il tempo di trasporto prolungato (tempo di trasporto di circa mezzo mese è molto comune) porta a frequenti guasti del prodotto quando il prodotto raggiunge il cliente.Ciò ha turbato la maggior parte delle imprese di esportazione di reagenti per acidi nucleici.
La tecnologia liofilizzata per il reagente PCR ha aiutato il trasporto del reagente di rilevamento dell'acido nucleico del nuovo Coronavirus in tutto il mondo
I reagenti PCR liofilizzati possono essere trasportati e conservati a temperatura ambiente, il che non solo può ridurre i costi di trasporto, ma anche evitare i problemi di qualità causati dal processo di trasporto.Pertanto, la liofilizzazione del reagente è il modo migliore per risolvere il problema del trasporto di esportazione.
La liofilizzazione comporta il congelamento di una soluzione allo stato solido, quindi la sublimazione e la separazione del vapore acqueo sotto vuoto.Il soluto essiccato rimane nel contenitore con la stessa composizione e attività.Rispetto ai reagenti liquidi convenzionali, il reagente per la rilevazione dell'acido nucleico Novel Coronavirus liofilizzato completo prodotto da Liming Bio ha le seguenti caratteristiche:
Stabilità al calore estremamente forte:può resistere al trattamento a 56 ℃ per 60 giorni e la morfologia e le prestazioni del reagente rimangono invariate.
Stoccaggio e trasporto a temperatura normale:nessuna necessità di catena del freddo, nessuna necessità di conservare a bassa temperatura prima di dissigillare, liberare completamente lo spazio di conservazione a freddo.
Pronto all'uso:liofilizzazione di tutti i componenti, nessuna necessità di configurazione del sistema, evitando la perdita di componenti ad alta viscosità come l'enzima.
Target multiplex in un tubo:l'obiettivo di rilevamento copre il nuovo gene ORF1ab del coronavirus, il gene N, il gene S per evitare la genovariazione del virus.Al fine di ridurre i falsi negativi, il gene RNasi P umano viene utilizzato come controllo interno, in modo da soddisfare l'esigenza clinica di controllo della qualità del campione.